[摘要]　目的:筛选不同品种海龙的体外抗肿瘤活性部位。方法:采用MTT法观察海龙的各种提取物对多种人癌细胞株生长的影响。结果:尖海龙的95%乙醇提取物对KB细胞的生长具有抑制作用,并呈量效关系;粗吻海龙的脂溶性非皂化物具有不同程度的抑制人癌细胞株KB,Hela,Bcap37,K562,PAA细胞的作用,并有明显的量效关系;拟海龙的各提取物未见有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用。结论:海龙是一种有开发前景的抗肿瘤中药。由于海洋生物特殊的生活环境,海洋生物常能产生众多的结构特异的生物活性物质。目前,人们从海洋生物中发现了多种具有抗肿瘤作用的生物活性物质。海龙Syngnathus属于硬骨鱼纲Steichthys海龙目Syngnathiformes海龙科Syngnathidae,具有温肾壮阳、散结消肿之功效[1]。本实验观察了尖海龙、拟海龙、粗吻海龙的各提取物对人癌细胞株的细胞毒作用,确定了尖海龙、粗吻海龙的体外抗肿瘤的活性部位。
   
    1　材料和方法
   
    1.1　药材来源
   
    海龙购于河北省安国市药材市场,经浙江大学药学院生药教研室郭汉生教授鉴定为尖海龙Syng-nathus acusLinnaeus,拟海龙Syngnathoides biac-uleatus(Bloch),粗吻海龙Trachyrhamphus serratus(Temminck et Schlegel)。
   
    1.2　样品配制
   
    取尖海龙粗粉适量,95%乙醇提取,回收溶剂得醇提浸膏。将浸膏以氯仿萃取,分别回收溶剂得醇提脂溶物氯仿萃取物和醇提水层。另取尖海龙醇提后的残渣,水提取,回收溶剂得水提物。取拟海龙和粗吻海龙粗粉适量,95%乙醇提取,回收溶剂得醇提浸膏。将浸膏依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取,回收溶剂得石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物、醇提水层。石油醚萃取物经皂化后再用乙醚萃取,乙醚萃取液经回收溶剂得非皂化物。醇提后的海龙残渣用水提得水提物。取各提取物适量,用生理盐水配成所需浓度,脂溶物以DMSO助溶,其最终浓度小于0.05%。DM-SO在该浓度下对细胞的生长无影响。
   
    1.3　方法[2]
   
    人癌细胞株KB,Hela, Bcap37, K562,PAA(浙江医科大学肿瘤所细胞室常规传代培养)在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液,37℃,5%CO2培养箱中生长至细胞旺盛,经0.25%胰酶加0.02%ED-TA消化,制成细胞悬液,将细胞悬液均匀接种于96孔微量培养板中(细胞浓度为5×105•ml-1),给药组分别加入不同剂量的尖海龙、拟海龙、粗吻海龙各提取物,对照组加入相应的溶剂,加药后细胞培养72h,按MTT法用酶标仪在550 nm波长处测定吸光度(A)值,并按下列公式计算其抑制率。
    　抑制率=对照组A值-试验组A值对照组A值×100%
   
    2　结果
   
    2.1　尖海龙提取物对KB细胞的作用
   
    尖海龙提取物对KB细胞的作用结果见表1。从表1可见,尖海龙的95%乙醇提脂溶性物质可抑制KB细胞的生长,并呈明显的量效关系。
   
    2.2　拟海龙提取物对KB细胞的作用
   
    拟海龙提取物对KB细胞的作用结果见表2。从表2中可见,拟海龙的各种提取物未见有明显的体外抑制KB细胞生长的作用。
   
    2.3　粗吻海龙各种提取物对KB细胞的作用
   
    粗吻海龙提取物对KB细胞的作用结果见表3。从表中可见,粗吻海龙的脂溶性非皂化物具有显著的抑制KB细胞生长的作用,并呈明显的量效关系。
   
    2.4　粗吻海龙非皂化物对Hela,Bcap37,K562,PAA细胞的作用
   
    在观察粗吻海龙提取物非皂化物部分对KB细胞作用的基础上,进一步观察了粗吻海龙非皂化物对Hela,Bcap37,K562,PAA细胞的作用,结果见表4。从表中可见,粗吻海龙提取物非皂化物部分对Hela,Bcap37,K562,PAA细胞的生长均具有不同程度的抑制作用。
   
    3 讨论
   
    从以上结果可见,3种海龙的体外抗肿瘤活性是有差异的。其中粗吻海龙具有较明显的体外抗肿瘤活性,粗吻海龙的脂溶性非皂化物不仅具有抑制KB细胞生长的作用,且具有不同程度抑制人癌细胞株Hela,Bcap37,K562,PAA生长的作用。尖海龙醇提脂溶性部分也能抑制KB细胞的生长。而拟海龙的各提取物未见有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用。粗吻海龙的脂溶性非皂化物对不同肿瘤细胞系的细胞毒活性具有选择性。对5种肿瘤细胞KB,Hela,Bcap37,K562,PAA的IC50分别为150μg•ml-1,182μg•ml-1,131μg•ml-1,336μg•ml-1,340μg•ml-1,其中KB细胞最为敏感,其次为Bcap37细胞。在历版《中国药典》收载的海龙为刁海龙、拟海龙、尖海龙,粗吻海龙仅仅作为地方习用品[3]。而本实验中揭示了粗吻海龙也具有体外抗肿瘤活性,从而为扩大海龙药源,进一步开发利用海龙这一宝贵的海洋生物资源提供依据。同时,尖海龙和粗吻海龙体外抗肿瘤活性部位的确定也为海龙新药的开发奠定了一定的基础。
   
    表1　尖海龙各种提取物对KB细胞的抑制率% 略
    表2　拟海龙各种提取物对KB细胞的抑制率 略
    表3　粗吻海龙提取物对KB细胞的抑制率% 略
    表4　粗吻海龙提取物非皂化物部分对Hela,Bcap37,K562,PAA细胞的抑制率% 略
   
   
    [参考文献]
    [1]　中国药典•一部•1985•255•
    [2]　韩　锐•抗癌药物研究与实验技术•北京:北京医科大学中国
    协和医科大联合出版社,1997•284•
    [3]　《广东中药志》编辑委员会•广东中药志•第一卷•广州:广东
    科技出版社,1994•772•