摘要:目的:研究海狗肾对雄性老龄大鼠的杭衰老作用.方法:以环磷酰胺造成雄性大鼠生殖系统受损模型，灌胃海狗肾30d后，测定血清睾酮含量，血清SOD活性和MDA含量；采用石蜡包埋，H-E染色的方法，光镜下观察睾丸的组织学变化。结果:海狗肾能够显著提高正常大鼠和生殖系统受损模型大鼠的血清睾酮含量，改善其睾丸间质细胞的功能状态，促进精子的发生与发育；显著提高血清SOD活力，降低血清MDA含量。
   
    结论:海狗肾具有显著的抗衰老作用。
   
    关键词:海狗肾；抗衰老；血清睾丸酮；丙二醛(MDA)；超氧化物歧化酶(SOD)；曲细精管；间质细胞
   
    海狗肾(Testis et Penis Callorhini)为海狮科动物海狗(Callorhinus ursinus Linnae-us)及海豹科动物多种海豹的雄性外生殖器。是一种珍贵的中药材，其味咸，性热，具有温肾壮阳，益精补髓等功效，临床上常用于治疗阳痿和性功能衰退，尤其在中国和日本，海狗肾自古以来就被作为壮阳药使用[1--3]。近年来，由于中国可以合法的从加拿大收购被猎杀的海狗，因此，海狗项目的开发，提供了丰富的海狗肾资源。本文拟以海狗肾为材料，雄性大鼠为研究对象，探讨海狗肾壮阳抗衰老的作用机理，以期为合理开发利用海狗肾及在临床上的正确使用提供理论依据。
   
    1实验材料
   
    1. 1实验动物:Wistar雄性大鼠，体重为520±40g,14月龄，山东医科大学动物房提供。
   
    1. 2海狗肾(干品):竖琴海豹(Harp Seal)即鞍纹海豹(Phoca groenlandica Erxleben)的雄性生殖器官，包括睾丸、附睾、精囊腺、前列腺及阴莖，由海南加华公司提供。
   
    1. 3测定用试剂:注射用环磷酰胺为clo-phosphamide(CYP) (200mg每支)，上海华联制药有限公司出品，批号为20003120 睾丸酮碘标放射免疫测定试剂盒，美国DPC公司出品，批号为20006,丙二醛(MDA)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号为200109100 超氧化物歧化酶( SOD)测定试剂盒，规定每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个亚硝酸盐单位(NU) ,南京建成生物工程研究所提供，批号为20010718。
   
    1.4主要使用仪器:2011型γ－免疫计数器；Olympus BH 2光学显微镜；半自动生化分析仪。
    2方法与结果
   
    2. 1海狗肾的处理工艺
   
    海狗肾一前处理去除阴莖骨－绞碎－酒精浸泡－真空干燥一粉碎－120目细颗粒，取此粉末适量，用蒸馏水配至所需浓度的水悬液。
   
    2. 2海狗肾对血清睾丸酮（T)含量的影响
   
    根据预实验的结果，将wistar大鼠随机分成4组，每组10只:正常对照组；给药组；环磷酰胺对照组；环磷酰胺给药组。给药组动物其给药剂量为70mg 。 kg -1 。d-1 (ig体积为0.01ML。g-1)，相当于人口服推荐剂量的5倍；对照组动物ig同体积的生理盐水，连续30d；环磷酰胺组动物自ig的第1d起，ip环磷酰胺，其剂量为20mg•kg -1•d-1，连续5d,造成生殖器官损害模型。于末次给药后24h,采用股动脉放血的方法处死动物，收集血液，分离血清，参照其说明书的操作步骤进行动物血清睾丸酮(T)含量测定。结果见表1，环磷酰胺能够破坏雄性大鼠生殖系统的功能，显著降低血清睾酮的含量(P<0. 05)。而海狗肾则能对这种破坏作用进行有效的阻止和修复，显著提高其血清睾酮的含量(P<0. 0I)；正常大鼠ig海狗肾30d后，血清睾酮的含量也明显高于正常对照组(P<0. 05) ,
   
    2. 3组织学观察
   
    实验方法同2. 2. 1。取各分组动物的睾丸，经Bouin s液固定，石蜡包埋，H-E染色，作组织学观察并进行显微拍照。在光学显微镜下可见，正常对照组大鼠的睾丸中，曲细精管内生精上皮层次较少，管腔内精子少，偶尔可见脱落的未成熟细胞，且异常精子较多，曲细精管间的间质细胞萎缩(见图版1)；而ig海狗肾的正常大鼠的曲细精管饱满，管腔内充满精子，精子具有很强的活力，互相结合成旋球状，曲细精管间的间质细胞完整且饱满(见图版2)；经环磷酰胺损伤的大鼠，其曲细精管基本丧失了生成精子的作用，多数管壁仅有精原细胞和初级精母细胞，有的管壁中可见其它发育时期的细胞已退化或脱落。管腔内无精子，曲细精管间的间质细胞核呈固缩状态(见图版3)；而环磷酰胺给药组的大鼠其曲细精管的生精上皮是由处于不同发育阶段的细胞组成，管腔内已有精子，但多为异常精子(见图版4)。
   
    图版说明
    图版1正常对照组大鼠睾丸横切面(260X )，示曲细精管和间质细胞。
    图版2正常海狗肾组大鼠睾丸横切面(130X)，示曲细精管壁的生精上皮和管腔中的精子。
    图版3 CYP对照组大鼠睾丸横切面(260X)，示曲细精管的生精上皮主要是由精原细胞和初级精母细胞组成。
    图版4 CYP十海狗肾组大鼠睾丸横切面(130X),示曲细管壁的生精上皮中有处于不同发育时期的细胞，管腔中有精子存在，但精子不正常。
   
    2. 4海狗肾对血清丙二醛(MDA)含量和血清超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响
   
    采用实验2. 2. 1分离出的血清，参照各自说明书的操作步骤，分别进行血清MDA含量和血清SOD活力的测定。结果见表1,海狗肾可显著提高正常老龄大鼠血清SOD活力和降低血清MDA的含量(P<0. 01),并能有效修复环磷酞胺对机体抗氧化酶系统的损伤，提高其血清SOD活性，降低MDA含量(P<0.05)
   
    3 讨论
   
    神经内分泌学说是现代医学有关衰老本质研究的主要学说之一，而下丘脑一垂体一性腺轴功能的衰退在神经内分泌系统中是发生最早并最引人注目的。实验结果表明，正常老龄大鼠体内血清睾酮含量显著降低，睾丸的生精上皮出现退行性变化，生精功能减退。而ig海狗肾30d后，组织学观察显示，海狗肾可明显改善睾丸间质细胞的机能状态，促进精子发生与发育，这一结果与其体内睾丸酮含量显著提高相一致。睾丸主要是由曲细精管和间质细胞组成，曲细精管的主要作用是产生精子，间质细胞的作用是产生雄激素(主要是睾丸酮)，二者均受到下丘脑一腺垂体的调节。下丘脑分泌的促进腺激素释放激素经垂体门脉系统到达腺垂体，促进腺垂体的促性腺细胞分泌卵泡激素(FSH)和间质细胞刺激素（LH) , FSH除启动精原细胞的发育外，还作用于曲细精管的支持细胞，通过G蛋白激活cAMP系统，刺激支持细胞产生雄结合蛋白(ABP)，使曲细精管内集聚高浓度的雄激素，完成精子的发生，即FSH在生精过程中起始作用，只要生精过程开始后有适量的睾酮，生精过程便可继续不断［4］,LH作用于睾丸的间质细胞，刺激间质细胞产生睾酮。根据CYP导致的生殖系统受损模型大鼠，灌胃海狗肾后的睾丸组织学变化和血清睾酮含量的提高，可以推断海狗肾的壮阳机理主要是作用于睾丸间质细胞，有类似于LH的作用，与张洪［5］关于日本海马的壮阳机理相似。
   
    自由基学说是衰老的一个重要理论，该学说认为氧化是导致衰老、细胞破裂和进行性退行性病变的重要原因。而SOD通过对超氧阴离子自由基的歧化作用，保护生物膜不被氧化而延缓衰老。实验结果表明，海狗肾能够显著提高SOD活性降低MDA含量，且对CYP所致的SOD活性的下降有显著的修复作用。因此，通过提高机体SOD的活性增强机体的抗氧化能力，延缓衰老，是海狗肾的作用机理之一。
   
    综上所述，海狗肾具有有效改善和修复大鼠睾丸间质细胞的功能，提高内源性雄性激素的作用，并通过增加机体抗氧化酶活性，起到抗衰老的作用。
   
    表1海狗肾对雄性老龄大鼠血清T含量，血清MDA含量及血清SOD活力的影响（略）
   
    参考文献
    ［1］江苏新医学院.中药大辞典〔M〕.上海:上海人民出版社，1977；1937.
    ［2］山下欣二 近世古文献 海兽类2_才`Y卜个了.海洋生物[C].1990,12(4)；312.
    ［3］张建中.竖琴海狗豹可食部分的营养成分与加工利用（1〕中国海洋药物，1996,3:47.
    [4]徐建春，赵永平，陶志鹅，等.海洛因依赖及戒断后雄性大鼠性腺轴组织病理学研究［1］.中国药物依赖性通报，1997,6(3):140.
    [5〕张洪，罗毅，罗顺德. 日本海马对雄性大鼠附性器官及垂体一性腺轴的影响［J］.中国海洋药物，2001,20(2),39.